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GlnR和Fnr介導植物乳桿菌WU14的Nir表達調控機制

  • 作者：徐波|責編:劉軍//孫高潔
  • 出版社：化學工業
  • ISBN：9787122449443
  • 出版日期：2024/04/01
  • 裝幀：平裝
  • 頁數：130
人民幣：RMB 80 元      售價：元
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內容大鋼
    本書為作者團隊多年從事乳酸菌分子生物學和基因調控研究系列成果的總結。以植物乳桿菌WU14為研究對象，以乳酸菌亞硝酸鹽還原?系統的調控為突破口，主要探討了乳酸菌氮代謝全局性調控蛋白GlnR和Fnr對亞硝酸還原?Nir的調控機制，從轉錄水平和基因表達上著手分析亞硝酸鹽脅迫下植物乳桿菌WU14全局性轉錄調控蛋白GlnR和Fnr及Nir對氧感應機制，驗證了Fnr與Nir和nir啟動子以及Fnr與GlnR的相互作用，闡明了GlnR和Fnr對nir操縱子的多層次表達調控機理，以期為構建乳酸菌氨代謝的基因轉錄網路、明確基因轉錄的相互調控關係和關鍵調控基因提供理論和技術支持。
    本書主要面向食品微生物發酵和應用研究的科研工作者，特別適用於乳酸菌功能基因挖掘和基因調控研究領域的科研工作者，期望能夠對食品微生物和益生菌分子生物學等科研工作者的研究提供幫助。
作者介紹
徐波|責編:劉軍//孫高潔
目錄
第1章  緒論
  1.1  亞硝酸鹽與食品
    1.1.1  亞硝酸鹽在食品行業的應用
    1.1.2  亞硝酸鹽對人體的危害
    1.1.3  醬腌菜和泡菜中亞硝酸鹽的產生與控制
  1.2  亞硝酸鹽還原?
    1.2.1  亞硝酸鹽還原?降解亞硝酸鹽途徑
    1.2.2  亞硝酸鹽還原?的分類
    1.2.3  亞硝酸鹽還原?的功能
  1.3  植物乳桿菌
    1.3.1  植物乳桿菌的功能
    1.3.2  植物乳桿菌的脫氮能力
    1.3.3  植物乳桿菌在醬腌菜和泡菜中的應用
    1.3.4  植物乳桿菌WU
  1.4  細菌氮代謝研究
    1.4.1  調控因子與啟動子的相互作用
    1.4.2  GlnR調控因子
    1.4.3  Fnr調控因子
    1.4.4  Fnr調控因子對細菌氮代謝的調控
    1.4.5  luxS和HK等全局性調控因子對亞硝酸鹽代謝的調控
  1.5  植物乳桿菌遺傳轉化體系
    1.5.1  國內外研究進展
    1.5.2  工業應用
  參考文獻
第2章  亞硝酸鹽脅迫下植物乳桿菌WU14的Nir食品級高效誘導表達及其?學性質研究
  2.1  亞硝酸鹽脅迫下植物乳桿菌WU14對亞硝酸鹽降解能力分析
  2.2  Nir基因克隆和生物信息學分析
  2.3  重組質粒pRNA48-Nir的構建及Nir誘導表達
  2.4  植物乳桿菌WU14的基因組測序和分析
  2.5  結論
  參考文獻
第3章  亞硝酸鹽脅迫下植物乳桿菌WU14中GlnR與Nir相互作用研究
  3.1  Trans 1/pET-30a/Nir表達載體的構建與檢測
    3.1.1  亞硝酸鹽還原?保守片段Nir的獲取
    3.1.2  Nir誘導表達載體的構建
    3.1.3  Nir蛋白誘導與SDS-PAGE分析
  3.2  植物乳桿菌GlnR基因克隆和表達載體的構建與檢測
    3.2.1  T3-glnR構建
    3.2.2  pET-30a-glnR的表達載體構建
  3.3  GlnR與Nir啟動子體外相互作用研究
    3.3.1  pNir啟動子基因擴增及Trans1/T3/pNir菌落PCR驗證
    3.3.2  GlnR基因片段的重新獲得
    3.3.3  誘餌載體與表達載體的構建
    3.3.4  細菌單雜交實驗誘餌載體與表達載體?切驗證
  3.4  結論
  參考文獻
第4章  亞硝酸鹽脅迫下植物乳桿菌WU14中GlnR與Nir表達調控機制研究
  4.1  利用酵母雙雜交研究GlnR與Nir的互作與表達調控
    4.1.1  亞硝酸鹽還原?（Nir）基因和GlnR基因的克隆
    4.1.2  GlnR-pGBKT7誘餌載體和報告載體Nir-pGADT7的構建

    4.1.3  菌落PCR檢測重組載體pAD-Nir和pBD-GlnR
    4.1.4  融合載體的自激活和毒性檢測
    4.1.5  亞硝酸鹽還原?（Nir）和調控蛋白GlnR相互作用分析
    4.1.6  植物乳桿菌WU14 RNA的提取
  4.2  凝膠阻滯驗證GlnR蛋白與Nir互作和表達調控
    4.2.1  PCR擴增GlnR基因
    4.2.2  pPIC9-GlnR表達載體的構建
    4.2.3  SDS-PAGE分析重組載體pPIC9-GlnR的表達產物
    4.2.4  pE-T30a-GlnR表達載體的構建
    4.2.5  GlnR蛋白的誘導表達與純化
    4.2.6  GlnR蛋白與亞硝酸鹽還原?（Nir）的相互作用
  4.3  qRT-PCR實驗分析亞硝酸鹽脅迫GlnR對Nir的表達調控作用
    4.3.1  WU14生長曲線測定
    4.3.2  實時熒光定量PCR（qRT-PCR）
  4.4  結論
  參考文獻
第5章  Fnr參與植物乳桿菌WU14亞硝酸鹽降解的調控機制
  5.1  Fnr和GlnR的重組表達和純化
    5.1.1  fnr和glnR基因擴增及序列分析
    5.1.2  Fnr和GlnR克隆載體的構建
    5.1.3  Fnr和GlnR重組表達質粒的構建
    5.1.4  Fnr和GlnR重組蛋白的誘導表達、純化和檢測
  5.2  凝膠阻滯（EMSA）驗證Fnr和GlnR與nir啟動子的相互作用
    5.2.1  PglnR和Pnir啟動子序列的擴增生物素標記
    5.2.2  EMSA驗證Fnr與Pnir啟動子的互作
    5.2.3  EMSA驗證GlnR和Pnir啟動子的互作
    5.2.4  EMSA驗證Fnr和PglnR啟動子的互作
  5.3  qRT-PCR驗證fnr和nir的相對錶達量
    5.3.1  不同培養條件下植物乳桿菌WU14的生長曲線
    5.3.2  植物乳桿菌WU14降解NaNO2能力
    5.3.3  植物乳桿菌WU14的RNA提取
    5.3.4  RNA反轉錄
    5.3.5  fnr和nir相對錶達量驗證
  5.4  結論
  參考文獻
第6章  植物乳桿菌WU14 L-阿拉伯糖異構?分子生物學、發酵工藝優化及熱穩定性分子改良
  6.1  高產D-塔格糖植物乳桿菌WU14的L-AI基因的分析、食品級誘導表達及其?學性質的研究
    6.1.1  植物乳桿菌WU14生物轉化D-塔格糖分析
    6.1.2  L-AI基因的擴增與TA克隆
    6.1.3  高產D-塔格糖乳酸菌L-AI基因的核?酸序列分析
    6.1.4  高產D-塔格糖乳酸菌L-AI蛋白的二級結構預測分析
    6.1.5  高產D-塔格糖乳酸菌L-AI蛋白跨膜螺旋分析和信號?分析
    6.1.6  高產D-塔格糖乳酸菌L-AI蛋白的三級結構預測分析
    6.1.7  高產D-塔格糖植物乳桿菌WU14的L-AI?學性質研究
    6.1.8  重組PCR技術去除植物乳桿菌WU14 L-AI基因中的NcoⅠ?切位點
    6.1.9  重組質粒pRNA48-L-AI的構建及驗證
    6.1.10  SDS-PAGE篩選nisin誘導L-AI基因表達的最佳誘導劑量及誘導時間
    6.1.11  L.lactis NZ9000/pRNA48-L-AI重組菌的遺傳穩定性分析
    6.1.12  L.lactis NZ9000/pRNA48-L-AI重組菌的L-AI?學性質研究
  6.2  植物乳桿菌WU14高產D-塔格糖的發酵工藝優化和分離提純研究

    6.2.1  L-AI發酵動力學模型研究
    6.2.2  D-塔格糖分離純化的研究
    6.2.3  硼酸鹽催化L-AI產D-塔格糖的研究
  6.3  植物乳桿菌WU14的L-AI耐熱性分子改良
    6.3.1  L-AI同源建模
    6.3.2  突變位點的預測
    6.3.3  突變體的表達
    6.3.4  野生型及突變型L-AI最適溫度及熱穩定性的測定
    6.3.5  野生型及突變型L-AI最適pH及pH穩定性的測定
  6.4  結論
  參考文獻
第7章  植物乳桿菌WU14 6-磷酸-β-葡萄糖??的基因克隆、蛋白質表達以及生物信息學分析
  7.1  植物乳桿菌WU14的8個β-葡萄糖??編碼基因的克隆
  7.2  SDS-PAGE分析重組蛋白
  7.3  目的基因BglAW14、BglBW14、BglCW14、BglDW14、BglEW14、BglFW14、BglGW14和BglHW14的生物信息學分析
    7.3.1  氨基酸序列分析、跨膜結構和信號?預測
    7.3.2  氨基酸序列比對分析及系統發育樹分析
    7.3.3  蛋白質二級結構預測
    7.3.4  亞細胞定位
  7.4  結論
  參考文獻

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